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                Biozellen3D類器官培養基質膠使用步驟及成功案例

                發布時間:2021/12/9 14:56:43      閱讀次數:249

                 使用步驟

                A、試劑制備

                A基質膠:將A基質膠溶于37℃水浴槽回溫10分鐘, 確認完全融解.

                C緩沖溶液(1X)制備:使用前將10X C緩沖溶液用冰的無細胞培養液(例如: 無血清DMEM、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .

                D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

                B、Biozellen®3D類器官培養基質膠的制備

                全部步驟需要在無菌環境內操作,操作步驟如下:

                1. 將24孔培養板放置于冰上預冷。

                2. 細胞計數后取 2×105~2×107 細胞與 0.5 毫升 37℃ 培養基均勻混合,并與0.5毫升37℃ A膠按照 1:1 等比例均勻混合,最終細胞密度105~107cells/mL。

                注:請選擇適當的培養溶液與條件進行試驗,貼壁細胞應在~80% 匯合度下培養。

                3.取 20-40 微升步驟 2 含細胞的混合 A 膠溶液滴于 步驟 1 預冷的培養板上,膠體將于 5 分鐘內成膠。 注: 測試膠體是否成膠,可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認。

                4.待膠體成膠后,添加1毫升冰的1X C緩沖溶液,并蓋過步驟3 的膠溶液,固定 15 分鐘。

                5.待15分鐘固定后,小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長之培養基溶液。

                6.將含有細胞的膠于37°C 二氧化碳培養箱內進行7~14天的培養,并觀察細胞球體的形成,按正常培養基更換頻率進行更換操作。

                C、溶膠與收集細胞球體準備程序

                小心的將培養基吸取移除,并用1X PBS進行清洗。

                小心的將 1X PBS 吸取移除,并添加 1 毫升冰的D緩沖溶液,蓋過膠滴于室溫反應 5分鐘。

                溫和的用1毫升移液管吸取,直到膠滴完全溶解。

                將含有細胞球體的溶液吸入1.5 毫升離心管,用1000 rpm的轉速離心10分鐘,移除上清液體并收集細胞球體做分析。

                D、收集單顆細胞準備程序

                在分離單細胞前,先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進行操作

                1. 添加trypsin-EDTA并與收集的細胞球體于37°C混合反應。

                2. 用1毫升移液管混合,直到細胞體完全分解。

                3. 待細胞球體完全分解,加入3倍體積的1X PBS,并用1000轉的轉速進行離心10分鐘,并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析。

                案例分享

                A.形成3D腫瘤球體成功案例分享

                B.Biozellen基質膠被溶解后分離的完整3D細胞結構照片

                培養后的3D細胞球體, 在Biozellen基質膠被試劑盒里面的

                D Buffer溶解分離后仍然可以得到完整的3D細胞結構

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